化學品哺乳動物細胞基因突變 檢測介紹
體外哺乳動物細胞基因突變試驗是利用培養的哺乳動物細胞作指示生物的體外遺傳毒理學試驗,可用于檢測有化學物質誘導的基因突變,適用的細胞系包括小鼠淋巴瘤細胞(L5178Y),中國倉鼠肺細胞(V79),中國倉鼠卵巢細胞(CHO),人類淋巴母細胞(TK6)等。這些細胞系,常用的遺傳學終點是檢測胸苷激酶(TK)圖標,次黃嘌呤鳥嘌呤轉磷酸核糖激酶(HPRT/HGPRT)圖標,黃嘌呤轉磷酸核糖激酶(XPRT)基因突變。TK、HPRT/HGPRT、XPRT突變試驗可以檢測不同的遺傳事件譜。
中科檢測動物毒理試驗中心,提供毒理檢測,可以開展化學品哺乳動物細胞基因突變試驗,報告具有CMA和CNAS資質。
化學品哺乳動物細胞基因突變 試驗細胞
本試驗有多種細胞類型可供選擇,包括L5178Y亞群CHO AS52V79或TK6細胞。用于本試驗的細胞類型對化學性致突變物應具有明確的敏感性,高的集落形成效率以及穩定的自發突變率,應檢測細胞是否被支原體感染,若已被感染則不能使用。
化學品哺乳動物細胞基因突變 試驗原理
細胞在正常情況下,能產生HGPRT(次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶),在含有6-硫代鳥嘌呤(6-thioguanine,6-TG)的選擇性培養液中,HGPRT催化產生核苷-5,-單磷酸(NMP),NMP摻入DNA中致細胞死亡。在致癌和(或)致突變物作用下,某些細胞X染色體上控制HGPRT的結構基因發生突變,不能再產生HGPRT, 從而使突變細胞對6-TG具有抗性作用,能夠在含有6-TG的選擇性培養液中存活生長。在有或無代謝活化系統的條件下,將細胞培養物暴露于受試物中適當時間,然后將細胞再傳代培養,在含有6-TG的選擇性培養液中,突變細胞會繼續分裂并形成集落,計數突變集落形成數,計算突變頻率,從而推斷受試物的致突變性。
化學品哺乳動物細胞基因突變 檢測標準
GB/T 21793-2008 化學品 體外哺乳動物細胞基因突變試驗方法
GBZ/T 240.10-2011 化學品毒理學評價程序和試驗方法 第10部分:體外哺乳動物細胞基因突變試驗
GB/T 15670.20-2017 農藥登記毒理學試驗方法 第20部分:體外哺乳動物細胞基因突變試驗
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