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細胞劃痕實驗原理及試驗詳細步驟
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  • 2024-06-26
  • 來源：中科檢測

細胞劃痕實驗（Wound Healing)是一種操作簡單，經濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。這種方法的原理是，當細胞長到融合成單層狀態時，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕”愈合。以此來觀察測量細胞的遷移侵襲能力。在化妝品修復功效評價中，細胞劃痕實驗可以模擬皮膚受損后的自然愈合過程，用于觀察化妝品等外源因素對細胞遷移、修復和相互作用的影響。

中科檢測可開展細胞劃痕實驗，評估化妝品成分或產品對促進皮膚修復和愈合效果，出具的化妝品修復功效評價報告具有CMA資質。

 

實驗原理

細胞劃痕實驗是通過在細胞單層上劃痕并通過延時顯微鏡定期捕獲圖像，從而研究細胞遷移運動、修復能力和細胞間相互作用的實驗室技術，基本原理是：在融合的單層細胞上人為制造一個空白區域，稱為“劃痕/傷口”，劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕/傷口”愈合，于細胞遷移過程中在開始和定期捕獲圖像，通過測量不同時間點的劃痕間距并計算差值，可對細胞的遷移能力做出判斷。

 

實驗步驟

1、準備


所有能滅菌的器械都要滅菌，包括直尺(或者24孔板蓋)和marker筆在操作前紫外照射30min（超凈臺內）。


2、流程


1）鋪板：將細胞完全消化后加入完全培養基終止消化，徹底將細胞吹打均勻，然后按比例鋪板。如果不均勻可以用手掌對著一橫邊和一縱邊輕輕拍打，切忌四個邊都拍打，這樣細胞很容易聚到中間。


2）掌握細胞狀態，過夜能長滿為佳。


3）第二天用黃槍頭比著直尺(或者槍頭，板蓋)，垂直在原來的培養基里劃痕，每孔1道（也可多劃幾道，參考細胞狀態），槍頭要垂直，不能傾斜。


4）用PBS清洗細胞1-2次，去除劃下的細胞，加入低血清培養基（或者完全培養基）；然后去顯微鏡下拍照，盡量高倍鏡低倍鏡都拍照，可以事先在板子底部用Marker筆畫上小圓圈標記來保證能拍到同一個點，作好記錄。


5）加藥，放入37度5%CO2培養箱，培養時間依照實驗要求進行，通常以12h、24h、48h為準。按所需時間節點安排取樣拍照時間。